专题文章
诺达病毒：淡水对虾养殖的紧急威胁
由于管理以及环境较差，淡水对虾农场面临该病原的威胁增加。亚太水产养殖网络中心的Biji Sam Kamalam、J., Saravanan, S 和 Ajith Stalin, J.L.说。
巨型淡水虾Macrobrachium rosenbergii（罗氏沼虾）原产于亚热带和热带水域。由于该虾生长快，个体大，抗病力强且出口市场价值潜力大[1]，因而具有重要的商业价值，在东南亚、以色列、日本、我国台湾省、拉丁美洲、加勒比海和非洲的一些国家是养殖最多的对虾品种之一。
该物种在国内和出口市场的需求增加已经导致高密度和集约化饲养的大型养殖场明显增加[2]。随着幼苗孵化所产量和对虾养殖场数量的快速发展，良好的管理和环境管理通常被忽略了。因此，在对虾受到应激时以及在不利环境里对虾体质变弱，病原很容易侵入[3]。
病毒病已经导致水产业遭受严重破坏，有时在感染后的数天里整个虾群都死亡[4]。相比农场养殖的对虾，罗氏沼虾通常被认为是对疾病不敏感的品种，这可能是由于淡水虾养殖一般较少集约化养殖的结果。但是，最近的疾病问题已经使巨型淡水虾养殖受到密切关注，这可能是由于集约化养殖以及种苗与亲鱼培养分离的缘故[5]。最近淡水对虾孵化所和农场发生的肌肉白浊病（WMD）已经对整个虾水产业产生重大冲击。
肌肉白浊病（WMD）
罗氏沼虾的肌肉白浊病也称为白体病或者白尾病，该病是一种新的严重的流行病，是由罗氏沼虾诺达病毒（MrNV）引起。该病首次在法国西印度群岛瓜德罗普岛的一家孵化所发现并报道[6]。接着在中国（大陆和台湾）和印度出现。该病导致孵化所和养殖场遭受巨大经济损失，在仔虾阶段死亡率通常达100％[10,13]。这些病毒在半盐水和淡水环境中生长旺盛。特定宿主是巨型淡水对虾，且感染期为幼体、仔虾和幼虾阶段[7]。还没有成年虾受感染的证据，但是成年虾可能是病原携带者。OIE还没有列出。
该病毒的地理分布是穿过北部南美（法国西印度群岛、多米加尼共和国和加勒比海地区）以及亚洲（中国、中国台湾省和印度）。在各个地方的临床症状和死亡类型是类似的，由此推测一些常见对虾群的迁移可能是WMD广泛分布的原因。但是，需要进一步研究来了解这种地理分布[7]。
病原和感染模式
WMD的病原体被认为是罗氏沼虾诺达病毒（MrNV）和超小病毒（XSV）。这两个RNA病毒在已感染的对虾中一直存在。MrNV是一个很小的二十面体非囊膜病毒，直径为26至27nm，在结缔组织细胞的细胞质上已经鉴定出来。该衣壳包含一个43 kDa（cp-43）的单个多肽[8]。已知诺达病毒含有一个基因组，该基因组含有两个单链正向RNA片段，RNA1，编码RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）病毒的一部分，RNA2编码衣壳蛋白。在感染细胞里， 还有RNA1次基因组的转录物RNA3 [9]。病毒复制发生在大多组织和器官结缔组织细胞的细胞质中。 XSV也是一个二十面体病毒，直径为15nm，其基因组由编码衣壳蛋白cp-17的线性单链正向RNA构成。因为它非常小，且缺乏复制所需的基因编码酶，有人认为XSV可能是卫星病毒，而MrNV为辅助病毒[10]。然而，在该病发病机理上这两种病毒各自的作用仍不清楚。该疾病在3-5天仔虾至脱盐后3周的幼虾上发生。据报道发病后的仔虾在出现不透明临床症状后2－3天死亡率为30-100％[5]。出现这些症状的仔虾极少成活，而存活下来的仔虾在养殖糖内生长一般[7]。感染PL的细菌学检测显示存在Staphylococcus spp（葡萄球菌）。而实验室用葡萄球菌攻毒健康PL没有复制出WMD病症状[5]。
症状和体征
该病的临床症状包括无生气、厌食以及仔虾和成年虾腹肌不透明。尾部白带是典型的临床症状，因此，该病也称为白尾病。这种乳白色不透明逐渐在两侧（前面和后面）扩大，严重情况会导致尾节和尾足恶化。有些没有尾足的受感染动物也观察到这种现象。从尾末（尾节部分）端开始变色，并逐渐向头部转移。最终所有腹部和头胸部肌肉都会受感染。在垂死的仔虾/幼虾中大多数受感染的组织都是腹部和头胸部的横纹肌以及肝胰腺的管状结缔组织 [7]。头胸部变大，可能会是原来的双倍大（被称为鳃泡病（branchiostegite blister disease，BBD）或者肿头综合征）。胸部打开后，在肝胰腺两侧上部会含有两个充满水样液体类似囊状的结构。受感染动物的组织病理学检测认为是高度坏死肌肉组织。在横纹肌发现多领域的透明性坏死的肌肉纤维[7]。退化肌肉区域发现很多黑化核，其中许多像包涵体。WMD的临床症状和组织病理学上非常类似罗氏沼虾中报道的先天肌肉坏死病[12]（IMN）。
诊断方法
为了遏制疾病传播和避免经济损失，必须开发一个灵敏度高专门的快速诊断方法用于该病的早期诊断病原（MrNV 和XSV）。该病诊断的三个基本方法是扫描、假定和证实法[7]。假定法包括观察腹部呈乳白色死亡仔虾的总观察，组织病理学研究，变化以大多组织和器官的结缔组织细胞嗜碱性网状细胞质内含物为苍白色到暗黑色为特征（甲基绿焦宁着色法可以用来鉴别血细胞中特定的绿色着色的MrNV病毒包涵体）以及病毒学研究。筛选和证实测试可以使用RT-PCR病毒和环介导等温扩增技术的基因组检测技术完成。其他MrNV 检测方法包括一个双抗体夹心酶联免疫吸附试验（DS-ELISA），三抗体夹心酶联免疫吸附试验（TAS-ELISA）和原位杂交中的斑点杂交。
反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）
RT-PCR是所有检测方法中最灵敏的探测MrNV的方法。该法用于从RNA病毒分析和扩增cDNA副本。可以通过特定引物扩增cDNA 来鉴别病毒。MrNV的引物序列为5’-GCG-TTA-TAG-ATG-GCA-CAA-GG-3’ （向前）和5’-AGC-TGT-GAA-ACT-TCC-ACT-GG-3’（反向）带有425 bp的扩增产物[7]。虽然非常灵敏和高特异性，需要使用热循环，因此只能在设备完善的实验室完成。最近开发了一种单管、双RT-PCR 法用于同时检测MrNV和XSV。
环介导等温扩增技术
环介导等温扩增技术(LAMP)程序被认为是白肌病的快速诊断法，它是一种特殊的核酸扩增法，可以在60–65°C下1小时内将目标核酸扩增到109个副本[13]。该法依赖最好的DNA聚合酶大片段，一个具有高替代活性的DNA 聚合酶。因为反应在等温下进行，可以使用简单便宜的水浴来完成。因为在热量变化上没有损失，LAMP的扩增效率极高。LAMP反应需要四个引物，这些引物特定识别DNA模版的6个不同部位。因此，有很高的检测特异性。由于生成了焦磷酸锰白色沉淀，可在一个小时内可以很快检测出阳性反应，因此无需进行琼脂糖凝胶电泳[14]。LAMP反应的时间动力学和灵敏度可以通过使用两个其他环形引物得到进一步改善。目前几乎没有应用LAMP方法学检测RNA病毒的报道。RT-LAMP法已经被开发作为快速廉价的检测方法。
传播
MrNV的垂直和水平传播已经被观察[7]。感染的亲虾作为病原携带者会导致仔虾染病。即使受感染群的卤虫群中也会传播该病。对虾对这些病毒不是很敏感但是试验结果显示对虾可能扮演MrNV 储存器的角色，在其组织系统中保留其毒力。
结论
预防胜于治疗，因为还没有治疗这种病毒病原的方法，只有在孵化所和养殖场采取更好的管理，这样才能将对虾养殖中白尾病的传播和影响最小化。强烈鼓励对亲虾和仔虾进行早期筛选。在对虾和种虾的迁移中必须严格执行免疫程序以预防病原传播。亲虾或者仔虾在MrNV检测阳性时候需要使用合适的动物检疫方法处理。在理解病原宿主相互作用、病毒系、免疫反应和药物开发上需要加强研究。
参考文献
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2009年2月
